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小鼠步态分析（墨迹法）

实验准备：

1. 使用由 3 块8mm厚亚克力板做成，如图所示的隧道（内径35cm*5cm*7cm）后面连接暗室（内部尺寸为10cm*10cm*7cm，门径长宽5cm*7cm），下方准备使用厚而光滑的纸张来跟踪步骤（水彩纸效果很好），将单条纸条成（长40cm*宽5cm）压在隧道下面。

2.使用两种对比色（如绿色和紫色）的无毒可水洗水性水彩颜料。为后肢指定一种颜色，为前肢指定第二种颜色。

实验步骤：

1.   测试是前让小鼠在新房间适应30分钟，然后开始行为分析。此外，由于老鼠天生是夜间活动的，因此在测试前确保所有老鼠都完全清醒并保持警觉至少 5 分钟。

2.   将纸条压在隧道下面，并用记号笔写上小鼠的信息和测试时间，并在隧道尽头可以放置食物奖励

3.   将要测试的鼠标从笼子中取出，并牢牢抓住它的颈背，确保抓住尾巴以稳定其后肢的运动，用同种颜料涂上前爪，使所有脚趾的整个底面和脚的中心都被油漆完全覆盖，重复此操作将小鼠的后爪涂上对应的颜料。用干净的湿布擦去鼠标在其身体其他部位上的任何油漆，以防止可能干扰数据收集的污迹。

4.   将鼠标放在隧道的起点，让它一直走到目标室，然后取回鼠标，用湿布轻轻擦去它的脚，然后将其放回笼子。

5.   之后用乙醇或等效的清洁溶液擦拭测试区域和隧道。

数据分析

1.使用始终间隔清晰、无污迹的足迹进行评分。如图B所示的是可以评分的足迹（每只脚必须至少有 2 个连续的步骤，但建议每只脚 4-6 步，不要包括小鼠的第一个和最后一个脚印）

2.使用步幅长度、步幅宽度和脚趾伸展作为可以使用此方法分析的三种不同步态度量。
注意：步幅长度和宽度需要清晰的连续打印，其中前足区域在油漆中明确定义。脚趾伸展不需要连续打印来评分，只需清晰打印单脚上的第一个和最后一个脚趾。但是，如果给定的足迹不包括在步幅长度或宽度的测量中，则不能对脚趾伸展进行评分。所有三个度量都以厘米为单位进行评估。

a)   将步幅定义为由同一只脚创建的两个连续足迹之间的距离（即，一个步幅）（图 1 A、1B）。

         i.      用铅笔在两个前肢脚印（由上面指定的颜色标识）的前脚区域周围画一个 2-4 毫米的圆圈，并用尺子在它们之间画一条线。

        ii.      记录从每个圆圈中间（即每个脚垫的中心）的两个打印之间的距离为右前 1 (RF1) 或左前 1 (LF1)。

      iii.      重复所有可以评分的步骤（RF2、LF2、RF3、LF3 等）。

        iv.      重复左右后肢脚印。

         v.      平均每个肢体的所有个人记录的步幅距离。对于统计分析，可以将各个群组成员一起平均。

b)   将步幅宽度定义为左右前肢或后肢之间距离的度量（图 1 A、1B）。

         i.      为了评估这个距离，从一个后肢的前足圆圈区域绘制并测量一条线，该线与对侧后肢的步幅线垂直相交。

        ii.      对所有可以评分的后肢打印重复此操作，然后平均测量值。前肢和后肢的步幅计算方法相同。

c)   将脚趾展开定义为单个前肢或后肢足迹上第一个和最后一个脚趾之间的距离（图1A、1B）。

         i.      使用卡尺测量第一个脚趾印的尖端和最后一个脚趾印的尖端之间的距离。

        ii.      对所有可以评分的后肢打印重复并平均测量值。前肢和后肢脚趾伸展的计算方法相同。

2.   如果纸不能被评分，让动物休息 10 分钟，然后再试一次。